大家好，感谢邀请，今天来为大家分享一下质谱法甲基化的问题，以及和甲基化蛋白质共价键判断的方法的一些困惑，大家要是还不太明白的话，也没有关系，因为接下来将为大家分享，希望可以帮助到大家，解决大家的问题，下面就开始吧！
对苯醌可以进质谱么
含义含义:具有不饱和环二酮结构（醌式结构）的一类化学成分的总称。主要包括:苯醌、萘醌、菲醌、蒽醌。概述：概述：第一节第一节结构和分类结构和分类OOOMeMeOOO邻苯醌（不稳定） 2，6-甲氧基苯醌（对苯醌）甲氧基苯醌（对苯醌）邻苯醌邻苯醌苯醌苯醌:对苯醌（多见）举例：举例：OOCH3(CH2-CH=C-CH2)n-HMeOMeOCH3辅酶Q10（n=10）OOOHOOOO胡桃醌（胡桃醌（-萘醌）萘醌）-萘醌萘醌 amphi-萘醌萘醌萘醌萘醌：（1 1，4 4）萘醌）萘醌（1 1，2 2）萘醌）萘醌 amphiamphi（2 2，6 6）萘醌）萘醌举例：举例：CHCH2CH=OOOHOHRCCH3CH3OOCH3Hn维生素K1（n=3）紫草素R=OH菲醌菲醌:邻菲醌、对菲醌邻菲醌、对菲醌OOOHRROOOCHCH3CH2OH丹参醌A R1=CH3丹参醌B R1=CH2OH丹参新醌甲R=丹参新醌乙R=丹参新醌丙R= CHCH3CH3 CH3OHOHH蒽醌蒽酚或蒽酮大黄素型大黄素型茜草素型茜草素型(两侧苯环上）两侧苯环上）(一侧苯环上一侧苯环上)依羟基分布单蒽核单蒽核蒽醌蒽醌:21367854OO10921367854OO109OOOHOHOHCH31、4、5、8位2、3、6、7位9、10 meso位，又称中位OOOHOH大黄素大黄素羟基茜草素羟基茜草素双双蒽蒽核核HOOHOOHOOHCOOHCOOHglcglcOOHHOHOOOHCH2OHCOOHglcglc番泻叶苷A（反式）番泻叶苷C（反式）番泻叶苷B（顺式）番泻叶苷D（顺式）（二蒽酮类） OOOOOOOHOHOHOHOHOHCH3CH3去氢二蒽酮去氢二蒽酮日照二蒽酮日照二蒽酮金丝桃素金丝桃素（中位萘骈二蒽酮中位萘骈二蒽酮）1、均以母核的衍生物形式存在，主要取代基：羟基、甲基、甲氧基、羟甲基、羧基等。 2、以游离形式存在。 3、以苷的形式存在：氧苷为主，碳苷。蒽醌类化合物的存在形式蒽醌类化合物的存在形式第二节第二节醌类化合物的性质醌类化合物的性质一、性状：有色结晶（共轭系统），蒽醌苷难以一、性状：有色结晶（共轭系统），蒽醌苷难以得到结晶。游离醌类升华性，小分子苯醌、得到结晶。游离醌类升华性，小分子苯醌、萘醌挥发性。萘醌挥发性。二溶解性：符合苷类溶解性的一般规律二溶解性：符合苷类溶解性的一般规律。蒽醌。蒽醌碳苷在水、有机溶剂中的溶解度都很小，但碳苷在水、有机溶剂中的溶解度都很小，但易于吡啶中。易于吡啶中。三酸碱性1酸性来源酸性来源羧基羧基(COOH)、酚羟基（、酚羟基（OH）2、影响酸性强弱的因素、影响酸性强弱的因素酸性基团的种类、数目及连接位置。酸性基团的种类、数目及连接位置。 3、酸性规律、酸性规律：含羧基的醌类酸性强于不含羧基者，含羧基的醌类酸性强于不含羧基者，酚羟基的数目越多，酸性越强，酚羟基的数目越多，酸性越强，-羟基的酸性强于羟基的酸性强于-羟基的酸性。羟基的酸性。溶解性含-COOH、2个-羟基羟基、1个-羟基羟基、5%NaHCO35%Na2CO32个以上个以上-羟基、羟基、 1个个-羟基羟基1%NaOH 5%NaOH酸碱性碱性碱性：来源于羰基氧原子，能接受质子表现微弱的溶于浓硫酸生成红色洋盐。四颜色反应1、Feigl反应反应颜色反应2、无色亚甲蓝显色试验：无色亚甲蓝显色试验：用于PPC、TLC喷雾剂，是检出苯醌、萘醌类的专用显色剂。试样在白色背景下显蓝色斑点。可借此与蒽醌类化合物相区别。颜色反应o3、与碱液反应与碱液反应（ Borntrge反应反应）颜色反应 4、与活性次甲基试剂反应（与活性次甲基试剂反应（Kesting Craven反应）反应）颜色反应o5、与金属离子的反应与金属离子的反应鉴别依据鉴别依据：o1-OH或1-OH或二个OH不在同环时，显橙黄橙色。o有一个-OH，而且另一个OH在其邻位时，显兰兰紫色。o若两个在间位时，显橙红红色。o若两个在对位时，显紫红紫色。颜色反应o6、对亚硝基二甲基苯胺反应对亚硝基二甲基苯胺反应反应类型反应类型反应试剂反应试剂反反应应特特征征鉴别特点鉴别特点意意义义Feigl反应反应甲醛、邻硝基苯甲醛、邻硝基苯紫紫**苯、萘、菲、蒽苯、萘、菲、蒽醌醌非醌成分非醌成分无色亚甲蓝无色亚甲蓝无色亚甲蓝溶液无色亚甲蓝溶液PC、TLC兰色兰色斑点斑点苯、萘醌苯、萘醌与蒽醌区别与蒽醌区别Borntr ge反应反应碱碱液液橙、红、紫红、橙、红、紫红、蓝蓝苯、萘、菲、蒽苯、萘、菲、蒽（羟基醌类）（羟基醌类）羟基蒽醌羟基蒽醌呈红色呈红色Kesting Craven反应反应活性次甲基试剂活性次甲基试剂（乙酰乙酸酯）（乙酰乙酸酯）蓝绿、蓝紫蓝绿、蓝紫苯、萘醌（苯、萘醌（+）蒽醌（蒽醌（）与金属离子与金属离子醋酸镁（铅）醋酸镁（铅）橙黄、橙红、橙黄、橙红、紫、红紫、紫、红紫、蓝色蓝色蒽醌（蒽醌（-酚羟酚羟基、邻二酚羟基）基、邻二酚羟基）羟基取代位置的羟基取代位置的鉴别鉴别对亚硝基二对亚硝基二甲基苯胺反应甲基苯胺反应01%对亚硝基对亚硝基-二甲基苯胺吡啶液二甲基苯胺吡啶液紫、绿、蓝、紫、绿、蓝、灰色灰色蒽蒽酮酮1，8-二羟基二羟基蒽酮呈绿色蒽酮呈绿色不同颜色反应鉴别特点及意义不同颜色反应鉴别特点及意义第三节第三节醌类化合物的提取分离醌类化合物的提取分离 1、在植物体内的存在状态 2、提取的目的（苷、苷元） 3、提取对象的性质（溶解性、水解性）提取分离工艺流程：提取分离工艺流程：原料甲醇、乙醇提取醇提物（游离苷元、苷）有机溶剂萃取或回流有机溶剂层（游离蒽醌）水溶液或残渣（苷）梯度萃取分离法有机溶剂纯化（乙酸乙酯、正丁醇萃取）色谱法分离（吸附色谱）色谱法分离硅胶，不能用氧化铝（葡聚糖凝胶、反相色谱）pH梯度法萃取分离工艺流程：梯度法萃取分离工艺流程：游离蒽醌氯仿溶液不同碱度的碱依次萃取5%NaHCO3液5%Na2CO3液5%NaOH液酸化、过滤同前同前强酸性蒽醌-COOH中强酸性蒽醌-OH弱酸性蒽醌 a-OH第四节醌类检识一、化学检识：颜色反应二、色谱检识：吸附色谱分配色谱纸色谱(PPC)薄层色谱(TLC)第五节第五节醌类化合物的结构研究醌类化合物的结构研究一、化学方法（辅助手段）二、波谱技术：包括UV、IR、NMR、MS等四大光谱技术。目前已成为醌类化合物结构研究主要技术手段。尤其在样品量比较少的情况下，波谱技术为首选方法。特别是核磁共振技术、质谱技术。一化学方法一化学方法1锌粉干馏：母核推断2氧化反应：取代基推断3衍生物制备：甲基化物、乙酰化物羟基蒽醌（-OH、-OH、醇OH、羧基）羟基数目、位置*甲基化试剂的选择性反应*（乙酰化试剂）推断元素分析或波谱分析（NMR）甲基化产物甲氧基数目（乙酰化产物）确定（乙酰基数目）不同功能基的甲基化反应能力：不同功能基的甲基化反应能力：-COOH-OH- OH-CHO CH 2N 2++-+(CH 3) 2SO4-++- CH3I+Ag 2O+所有酚OH、醇OH+甲基化反应：甲基化反应：曲菌素的甲基化反应：曲菌素的甲基化反应：乙酰化试剂乙酰化试剂醇OH-OH-OH烯醇式OH冰醋酸(少量乙酰氯)(冷)+---醋酐热(短时间)++--(长时间)+++(2个之一)-醋酐+硼酸(冷)++-(OH络合)-醋酐+浓硫酸(室温过夜)+++-醋酐+吡啶(室温过夜)++++乙酰化反应乙酰化反应（不同羟基的乙酰化反应能力）：（不同羟基的乙酰化反应能力）：曲菌素的乙酰化反应：曲菌素的乙酰化反应：1紫外可见（UV）光谱：共轭特征2、红外光谱（IR）:官能团特征3、核磁共振（13C谱）:分子骨架（ 1H谱）:基团特征4、质谱（MS）：分子量（M+.）二二波谱分析波谱分析OOOO苯苯醌醌240nm强峰 285nm中强峰400nm弱峰（苯甲酰基） 245nm 251nm335nm萘醌萘醌(醌样结构) 257nm（1）醌类化合物的紫外光谱特征）醌类化合物的紫外光谱特征OOOO苯甲酰基 252nm 325nm醌式结构 272nm 405nm蒽醌：蒽醌：羟基蒽醌：羟基蒽醌：峰位与结构的关系 230nm与总-OHOH数目有关 240260nm（苯） 262295nm（醌）与-OH有关，lg 4.1示有-OH，伴随峰红移 305389nm（苯） 400nm以上（醌）与-OH数目有关，数目越多，红移越大第一峰与羟基数目的关系：第一峰与羟基数目的关系：第五峰与结构的关系：第五峰与结构的关系：醌类母核醌类母核（ 2）红外光谱（）红外光谱（IR）OOOOOO苯环(16001480cm-1)双键羰基（1675 cm-1）羰基羰基苯环苯环羟基羟基（167516751653 cm-1 1653 cm-1）(1600(16001480 cm-1)(36001480 cm-1)(36003130 cm-3130 cm-1)1)羟基蒽醌羟基蒽醌羰基与羟基羰基与羟基(-OH)缔缔合相互影响化学键力合相互影响化学键力常数下降（常数下降（K）羟基蒽醌红外光谱（羟基蒽醌红外光谱（IR）特征：）特征：OOOOHH缔和羟基缔和羟基缔和羰基缔和羰基游离羟基游离羟基游离羰基游离羰基羟基蒽醌红外光谱（羟基蒽醌红外光谱（IR）特征：）特征：吸收峰向低波数位移游离羰基（高波数）游离羟基（-OH）（36003150cm-1）缔合羰基（低波数）缔合羟基（-OH）（ 3150cm-1以下）羰基峰的数目、位置与-羟基的数目及位置有关羟基蒽醌红外光谱（羟基蒽醌红外光谱（IR）特征：）特征：-OH数蒽醌类型游离羰基频率缔合羰基频率频率差0无-OH+--1 1-OH++ 24382 1，4-；1，5-二OH-+- 1，8-二OH++ 40573 1，4，5-三OH-+-4 1，4，5，8-四OH-+-羟基数目及位置对羰基频率的影响：羟基数目及位置对羰基频率的影响：3.核磁共振氢谱核磁共振氢谱(1H-NMR谱谱)(1)醌环上质子醌环上质子 OOH1OOHHH456醌环质子（2、3、5、6）672（）芳环质子芳环质子 8.06(-H, 5、8)7.73(-H, 6、7)醌环质子醌环质子6.95()(2)芳环上质子芳环上质子萘醌苯醌蒽醌芳环上质子：OOHH1458-H（1、4、5、8）8.07-H（2、3、6、7）7.67蒽醌(3)取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响 7245OOOHCH3OHOH甲基质子 2.12.9（或宽）（供电基，邻芳氢-0.15）（大黄素大黄素） a-OH质子1112邻、对芳氢-0.45-酚羟基质子（） 11邻、对芳氢-0.45取代基质子取代基质子及对芳环质子的影响及对芳环质子的影响:4OOHOHOHCH2OHH2羟甲基：-CH2-质子 4.6(sd)-OH质子4.06.0（供电基，邻芳氢-0.45）（芦荟大黄素芦荟大黄素） OOOHCH3OHO24CH3取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响:取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响:4OOOHOHCOOH2取代基取代基类型类型质子类型质子类型化学位移化学位移取代基取代基性质性质对芳环质子的影响对芳环质子的影响酚-OH-OH质子-OH质子1112 11供电基邻、对芳氢-0.45-CH2OH-CH2-质子-OH质子4.6(s或d)4.06.0邻芳氢-0.45-OCH3甲氧基质子4.04.5（）邻、对芳氢-0.45-CH3甲基质子2.12.9（或宽-烯丙偶合）邻芳氢-0.15对芳氢-0.1-COOH羧基质子11以下吸电基邻芳氢+ 0.8取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响取代基质子的化学位移及对芳环质子的影响OO184138.6131.7126.2136.6OOOH232030ppmppmOOOH161.8190.0124.2114.8118.9OOR28310ppmppm引入羟基烷基萘醌萘醌（上下对称）引入羟基 4.核磁共振碳谱（ 13C-NMR谱）（1）母核碳谱特征）母核碳谱特征（2）取代位移规律）取代位移规律OO182.5132.9126.6134.3OOOH187.9181.5161.3113.8123.7136.3118.8132.6引入羟基（邻对位定位基）引入羟基（邻对位定位基）邻、对位电子云密度邻、对位电子云密度，间位电子云密度减少，间位电子云密度减少，蒽蒽醌（上下、左右对称）醌（上下、左右对称） 5质谱（质谱（MS）质谱法特点： 1、超微量（微克级） 2、快速（数分钟） 3、提供分子量，元素组成、碳骨架及官能团信息。 4、既能定性，又能定量。 5、能最有效与各种色谱法在线联用。成为分析复杂体系的有利手段。（1）对苯醌的质谱特征对苯醌的质谱特征1分子离子峰为基峰。2相继失去2分子CO的碎片离子峰。3出现失去乙炔CHCH分子的碎片离子峰 m/z 82（A）及 m/z54(B)、 m/z80（C）。OOOCOCO.对苯醌的质谱裂解规律：对苯醌的质谱裂解规律：m/z 108 m/z80 m/z52AOOBC对苯醌的质谱裂解规律：对苯醌的质谱裂解规律：m/z 82（A） m/z54(B) m/z80（C）OOCH3CH3O.CHCHCOm/z 50m/z186 m/z 104 m/z 76 m/z 50（2）萘醌的质谱裂解规律：）萘醌的质谱裂解规律：1、游离蒽醌分子离子峰（M+）为基峰。2、碎片离子为相继失去两分子的CO及相应的双电荷离子峰。3、蒽醌苷得不到分子离子峰，基峰为苷元离子峰。（3）蒽醌类化合物的质谱特征）蒽醌类化合物的质谱特征OOO.COCOmz 208 mz180 mz152游离蒽醌裂解规律：游离蒽醌裂解规律：醌类化合物思考题：醌类化合物思考题：1、熟悉醌类化合物的分类、结构及重要的、有代表性的化学成分。2、掌握蒽醌的结构、分类（依据）、编号方法（2种）。3、熟悉蒽醌类成分在植物体内的存在形式。4、醌类化合物多呈有色结晶的原因何在。5、掌握醌类化合物的溶解性规律，熟悉二蒽酮类、蒽醌碳苷的溶解性特点。6、掌握蒽醌的酸性来源、酸性规律及应用。醌类化合物思考题：醌类化合物思考题：7、了解蒽醌的碱性来源及应用。 8、掌握醌类各种颜色反应的反应名称、鉴别原理、鉴别特点和鉴别意义。9、熟悉醌类各种提取方法（溶剂法、酸碱法、蒸馏法）的原理和适应范围。10、掌握甲醇、乙醇用于提取醌类成分的特点。11、掌握游离蒽醌与蒽醌苷的分离原理和方法。12、掌握梯度法分离游离蒽醌的原理、方法。13、掌握色谱法分离游离蒽醌的条件（吸附剂、洗脱剂）、原理及洗脱规律（洗脱顺序）。14、一般不用氧化铝，尤其不用碱性氧化铝分离蒽醌的原因何在。15、蒽醌苷在柱色谱分离以前的纯化方法、原理为何，意义何在。醌类化合物思考题：醌类化合物思考题：16、掌握葡聚糖凝胶用于分离蒽醌苷的原理、方法及洗脱顺序。17、掌握醌类化合物检识（理化、色谱）方法、鉴别特点和鉴别意义。18、了解锌粉干馏、氧化反应在结构测定中的意义。19、熟悉甲基化反应、乙酰化反应在蒽醌结构测定中的意义。醌类化合物思考题：醌类化合物思考题：醌类化合物思考题：醌类化合物思考题：20、熟悉常用甲基化试剂、乙酰化试剂的种类及作用特点。21、掌握蒽醌紫外吸收的特点及各吸收峰的归宿。22、掌握蒽醌紫外各吸收峰（峰）在结构测定中的作用（与结构的关系）。
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如何简单理解质谱分析法
如何选择质谱分析方法？——是用于研究蛋白，核苷酸还是小分子，这里也许有理想的答案正如其它先进的技术一样，质谱技术冲击带来了市场的膨胀，造成了多选择性的产品，专业性的术语，这也就无形中增加了研究人员选择合适于他们的系统的困难性。正如西雅图Fred Hutchinson癌症研究中心蛋白组主任Philip Gafken所说的那样，“无论大家相信与否，这种技术并没有如它们所被应用的那样被逐渐的了解，研究人员没有认识到利用这种技术的真正目的。”比如说三级四极质谱仪(Triple Quadrupole Mass Spectrom）是一种相对便宜一点，但扫描速率（scan rate）也相对比较慢的质谱仪，而目前精良的傅立叶变换离子回旋共振质谱仪（Fourier transform ion cyclotron resonance，FTICR）则在精确性和分辨率都是首屈一指的，当然价钱也会比较贵。 Gafken说道，“人们总是倾向于购买一些顶级的产品，但是事实上，这些应用中很大一部分都能由一些相对便宜一点的仪器来完成”，所以我们需要购买适用于各自需要的正确仪器。 1.Protein Chemist级对于protein chemist而言，需要得到的仅仅就是知道他在研究的是什么。通过分析一种蛋白的免疫共沉淀的成份，或者利用二维电泳识别特殊的蛋白斑点，protein chemist就可以了解这种蛋白质的生物学特性了。对于这种应用，快速而并不需要太精确的方法就可以满足需要了。推荐系统：MALDI+TOF理由：肽指纹图谱（PePtide Mass Fingerprinting，PMF）和基质辅助激光解析电离飞行时间(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight，MALDI-TOF)质谱是可以考虑的首选方法。 TOF是一种简单的质谱分析系统，灵敏度高，能进行从10原子质量单位到上百上千单位的片段分析。另一个TOF的优点就是分析的速度，伊利诺斯大学的化学副教授Neil Kelleher就表示“这就是它为什么能与MALDI配合工作的原因，你可以以一种高重复率在激光上操作，每秒获得许多光谱。”而MALDI则是一种首先就可以考虑的方法，但是并不适合如何人，来自华盛顿大学的化学教授，Journal of the American Society for Mass Spectrometry杂志的编辑Michael Gross就说，“如果你的免疫共沉淀中有20或30个蛋白，每一个有50条特殊带，那么你就有1000条带，利用MALDI并不能在气相中打到全部的”，为了得到更多的信息，必需要考虑一个可以提供序列详细信息的任意构造，比如MALDI-TOF-TOF，或者一个更加灵敏的仪器——离子捕获。 2.灵敏级难题总是出在事实本质的详细内容当中，对于蛋白而言，那就是指翻译后修饰了。比如说，假设你正在研究包含有乙酰化和三甲基化修饰的组蛋白，但是一个标准的质谱也许无法区别出这两种修饰，这时就需要高精度的仪器了，这种仪器能获得二位或者四位小数位的报告。推荐系统：LC+ESI+FTICR with ECD理由：准确度高的仪器可以区别对于所谓的正常（nominal-mass）仪器而言相同的分子，一般认为选择液相色谱（liquid chromatography，LC）与电喷雾电离化（electrospray ionization，ESI），以及傅立叶变换离子回旋共振质谱仪（Fourier transform ion cyclotron resonance，FTICR）相结合能达到高精度和高灵敏度的要求。也许还需要电子捕获解离技术（electron capture dissociation，ECD）来获得可重复的结果。虽然经典的碰撞诱导解离技术(collision induced dissociation，CID）介导的串联质谱方法可以进行斑点修饰（spot modifications），但是对于识别包含了修饰的蛋白残基而言，这并不是一种理想的方法，这主要是由于解离蛋白的时候常常会降解多肽的蛋白修饰，然而ECD则可以保持这种修饰的完整性。不过来自辛辛那提大学的Patrick Limbach提出一个忠告：这些仪器偏差范围小，因此可能会丢失掉一些未预期到的情况，比如天冬酰胺残基的脱酰胺，或者磷酸化。
甲基化蛋白质共价键判断的方法
判断蛋白质是否发生甲基化通常可以采用以下方法：
1、MS质谱法
质谱法是一种常用的鉴定蛋白质甲基化的方法。通过将蛋白质样品进行质谱分析，可以检测到甲基化修饰带来的质量差异。特定的谱峰可以被用来确定甲基化的位置和程度。
2、WB免疫印迹法
免疫印迹法结合特异性的抗体可以用于检测蛋白质的甲基化状态。首先，通过蛋白质电泳将样品分离，然后将蛋白质转移到膜上，并使用特异性的抗体与甲基化蛋白质结合。最后，通过化学或光学方法观察抗体与蛋白质结合的情况，从而确定蛋白质是否发生甲基化修饰。
3、甲基化特异性的酶联免疫吸附实验（MeDIP ELISA）
该方法利用甲基化特异性抗体结合甲基化DNA片段，然后使用酶标标记的二抗来检测DNA甲基化状态。这种方法可以用于检测甲基化特异性的蛋白质与DNA相互作用。
4、基于串联质谱的方法
通过将蛋白质进行酶切，并利用质谱分析检测酶切产物，可以识别和定位甲基化位点。这种方法通常需要先通过化学修饰或酶切使甲基化位点具有特异性。
蛋白质甲基化
以上方法通常需要在实验室条件下进行，且对于不同的样品和研究目的可能需要采用多个方法的组合来准确判断蛋白质的甲基化状态。
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